enzymy allosteryczne - poprawione obliczenia, enzymologia, enzymologia I
[ Pobierz całość w formacie PDF ]
Obliczenia:
AktywnoĞü wáDĞciwą enzymu wyraĪamy w Pmolach na minutĊ na mg biaáka czyli w U na
mg biaáka:
(
P
mol x min
-1
x mg biaáka
–1
)
( U x mg biaáka
–1
)
Wspóáczynnik absorbcji molowej dla NADH w 340 nm wynosi 6,22 x 10
3
lu M
-3
u cm
-1
wiÄŠc 1Pmol/ml NADH ma absorbancjÄŠ 6,22.
Zgodnie z prawem Lamberta – Beera:
A = c x l x
H gdzie: A - absorbancja badanej próby
c - stĊĪenie produktu ( szybkoĞü reakcji)
l - gruboĞü kuwety (cm)
H - wspóáczynnik absorbcji molowej
A
a wiÄŠc c =
l x H
po uwzglĊdnieniu rozcieĔczenia frakcji enzymatycznej i czasu inkubacji:
A
340
x R x V/vE R – rozcieĔczenie próby
c =
t
ink
x l x H V – objĊtoĞü caák. próby w kuwecie
vE – objĊtoĞü enzymu
t
ink
- czas inkubacji
A
340
x R x 16,25
c =
t
ink
x 1 x 6,22
A
340
x R x 2,6
c =
t
ink
Uzyskany wynik to aktywnoĞü enzymu wyraĪona w Pmole/min/ml. NastĊpnie naleĪy
obliczyü iloĞü biaáka w 1 ml (k = 37,0 [Pg/100Pl]) oraz aktywnoĞü wáDĞciwą dehydrogenazy
izocytrynianowej w otrzymanym preparacie.
[ Pobierz całość w formacie PDF ]