enz kolokwia, Rok II, enzymologia
[ Pobierz całość w formacie PDF ]
*1
z wYlsctowKl:
.
w1.mie
w putach metodyrozdzie|ania enzymw,
w ktrych decydujcymkryterium
jest
rnica
w ich wypadkowym adunkuelektrycznym.
co moeb1
ptzyczynnie wnikania biakado eluPAA podczas elektroforezy?
-
opisz metod.
w ktrej wykorzystuje si kwas trichlorowy do ilociowegomierzenia syntezy
ktrego
z bioogicznychpolimerw
(co
wchodzi
w sktradobranejprzez ciebie rnieszaniny
reakcyjnej,i
jakie
czynnosci nalezy
wykonac?)
. jaka jest
m.cz' Zwikq ktrego l7orovlr po 25krotnym rozcieczeniu dawaabsorpcjl.2'
jeli
wspcz1mnik
absorpcjiwynosi 000/(M*cm)?
_
Przedstaw
na rysunku postpkatalizowanej
przez
enzym
reakcji deaminacjiadenozynyw trzech
przypadkacha)gdyreakcjaprzebiegaw takim tempie' ie w
podanym
czasie doszodo
cakowitegoprzekszaceniasubStrafuw
plodukt
-
b) gdy do cakowitego
przeksztacenia
doszo
w trzykrotniekrtszym czasie
_
c)gdy
w przedstawionymczasie przereagor'.ao
zaledwie 107osubstratu
na drugie koo:
'
pod
jakimi
wzgldami
turbidometryczna
metoda
jest
lepszaod innych ci znanych?
-
Na czym bazlje
kadaze znanychci metod ilociorvegooznaczaniabiaka.i
jakie
s
ograniczenia
kadeiz nich?
-
Dwa rysunki przedstawiaj
c
e oczyszczanie na kolumnie
jonowymiennejjednoczenie
dwch
enzymw
pocho
dzcychZ tegosamegoekstraktu.a rinicych si nieznacznieadunkiem.Na
jendym
przedstaw
zastosowanie
..stromego''
gradientu"a na drugim
..paskiego...
Rozdziay
pzeprolvadzono na kolunrnie o tych samyclrrt'ymiarachi zbieranoftakcje
o tej sarnejobjtoci
uymie w punlitacho czym moga
si przekona
badajc
aktywnonukleozydazy'
adenozynowej
w ekstraktachz licienifubinu?
Jakie zjawiska
leu podstaw
dwch
poznanych
na wiczeniachsposobw mierzenia szybkoci
reakcji enzymaty
cznejna spektrofotometrze?
Jakimi nie zastosowanymina wiczeniachmetodami monatemierzy aktywno
a) deaminazy
adnozyny lub deaminazyAMP b) apyrazy c)nukleozydazy adenozynowej
|ali dla rozpatr1rnagozwi?ku to
l 8000/(M*cm).W
jaim
przedziale stetego zvtiry'kllna|eypracowa.
aby- stosujc
starrdardowkuwet-monabyowykony'wapomiary w zakresach
absorpcji 0.5.1
jonity?
-
Jakie
znasz
sposobyilociowegooznaczaniabiakaw rofworze?
-
Jakirni
metodami
moina ilociowooznaczaaktywnonukleozyda4,
adenoz1'nowej
_
Przedstawtrzernarnymi
liniami przebiegreakcji hydrolizowania Ap4A
z E.coli
-
a) w.obecnoci
?
takiego
steniaM2+ ktre zapewnia sprawny (maksymalny)przebieg
reakcji
-
b) w obecnocitakiego stenia
M2+ w ktrym rcakcja zachodzi 3
*wolniej
niw a)
c) gdy nie ma M2+
_
UWAGA-rarnti rysunku ustawtak. by przedstawianaw punkcie
a) zalenowiadczya
o tym.
ereakcjazasza
do koca
d)|aki
jon
okaza
si najefekty-wniej
szy dla tegoenzymu?
-
e)nazwij zjaw-isko
jakie
wykorzystywane
jest
w tej metodzieoznaczania
aktywnocihydrolazy
Ap4A
_
f)czy tmetodmona
oznaczaaktywno
fosforylazy Ap4A?
molou1' wspczynnik ekstycji ptzy dutej
dugoci
_
do
jakich
celw w pracach
nad enzymami moina Zastosowa
Sposobami
monawymy zaadsorbowanena anionicie
biako?
Przedstaw.
na
/suu
skuteczne oczyszczanie
enzymu na kolumnie
jonowyrniennej
jakimi
metodamimonamierzy aktywno
nukleoz-vdazyadenozynowej
jakimi
metodami
moina ilociowooznaczy aktyr,no
dearrrinazyAMP?
Dziki
jakim
urzdzeniommoiemy uzyskiwa liniowy
gradient
stenia?
Ktre zw.i7ki
moemyuydo strcania
polimerw. do kazdegodopisz przykadzastosowanlaw
badaniach
biochemicznych
do czego stosujemywymieniacze
jonowe
sclrematutzdzenia
do fonnowania gradientuwklsego
co wiesz
o nukleozie adenoz-vnowe
do czego uywamyTCA
przy
badaniu
biaeki innych poiimerw
narvsuj
w1'krestvwnocideaminazy
a)normalnyprzebieg reakcji. caysubstratw produkt
b)enzym statsi 2*bardziejwydajny
c)enzymn
po przerobieniupoowy
subStratuzdeaktywowa
si calkov'icie
rnasaczst:420. wsp.ekst.3000roztlyor
7orozcienczono200 krotnie.
jaka
bedize absorbcja
wymien cechy charakteryzujace katalize enzymatycz:na
czynniki wpllvajace na szybkosc reakcji katalizowanej
przez
typowy enzym. zilustruj wykresami
podzial enzymow dokonanyprzez komisje enzymatvczna
inhibitory reakcji enz. Rozne kryteriapodzialu. sposobyokreslaniatypu inhibicji.
umow sposobyregulacji aktwnosci enzynacznej. prvklady.
Uwzglednij rozne stopniezlozollosci
omawianlch sposobowregulacji
r1'liczi omow wykorzystanie enzymow w praktvce
niebialkowe skladniki enz"vmow.relacjawitarnina-koenz-vm
mutantybiochemiczne.
enzymopatie(.przyklady)
enzymy zasluzonedla rozwoju biologii.
biologii molekularnej
metodystosowane
przy
pomiarachaktywnosci enzymatycznej.podst.palametry.jednostki
akt.enz.
Wspczynnik ekstynkcji
rozpatry-wanegorwizkuwynosi
800/(M*cm).Ilokrotnie nale.
\
*
rozcieczy 20rnM
roztwr by prowadzi
pomiary w przedziale l.1.5
jednostek
optycznych w
kiuweceo
gruboci0.2cm?
Wymie te
aminokwasy wchodzcew sklad
bbiaekktre rnogdecydowao adunku
elektryczn1..
.iakie
decyduj
o dodatnim.a
iakie
o ujemnym?
Jaki
czl.nnik Zewntrzny
decydujeo wypadkowym adunku
biaka?
Co rnoeby
przyczynnie wizania si danego
enzymL|z anionitern?
Jakirni sposobami
monawymy
zaadsorbowanena anionice biako?
Przedstaw
na rysunku skuteczne oczyszczenie
enzymu na
kolumnie
jonow-vmiennej
dziki
jakiemu
urzdzeniumoemy
uzyskiwa liniowy
gradientste?
Podaj zjalviska fizyczne. ktre
wykorzystywano w metodzie oztaczania
biakaz uiyciem taniny
i wymie zalety tej metody
jakie
znasz
enzymy ktre monaoznaczastosujcefekt
hiperchromowy?A ktrych z poznanych
nie da
si oznaczyw ten sposb?
Molory w-sp.ekstynkcjiwynosi
25000/(M*cnD
jakie
stenietego zwizku
nale zastosowa.by
moina b1'owykon1.wa
pomiery w standardowejkuwecie
w rejonieabsorpcji rwnym 1l)
jak
mona
sobie radzi.gdy chcemy oznaczy
Km
o
ktrej wiemy eznajdujesi w rejonie 300uM,
a wic
wskazabewykonywa poniery szybkoci
reakcji przy steniurwnym od 0.5Km do 2 Km?
Sposoby
zagszczaniabiaek.
bez zniszczenia ich waciwoci
biochemicznych
M=347,w'sp.eks:15000
metody
pomiaru szybkocienzymatyczrej
(chyba
chodzi
o aktywno)deaminacjinukleazy lub
AMP
jaki
czynnik
zewntrznyma wpywna wypadkowy adunek
biaka
jakie
czyrrniki powodujw1'trcaniebiaeki
inrrychpolirnerw
(wy-mie
jakich)
oraz
jakie
z nich
stosujemydo
pozbycia
si biaek
z roztworw. Wypisz
jakie
wzory reakcji ktre
przeprowadzilimy
na wiczeniachi zaznacz prostokternsubstratyi kkiem
produkty
dla Ap4A a
)50ug
substarrtu.
reakcjado koca
b)2*mniei substratu
c)2*wicejenzymu
narysuj
wykes rozdzielenia na kolumnie chrom.(onowymiennei)
a)skuteczne
oczy szczania
b)nieskuteczneoczyszczanie
jakirni
metodami nona oznaczynukleozydazadenozynow
wyymie dwie substancje
w1,trcajcepolimery z roztworu wodnegoi napisz ich zastosowanle
izaniasibialkana
.ionicie
roztworu o masie 840gram.Znany
jest
wspolczynnik ekstynkcji:6400i(M*cm)
wiadomo eroztwr ten po rozcieczeniu 50* wykazaabsorbcje1.5
zjawiska wykorzystywane
prz-Y-
pomiarze akt.vwnocimetodspektrofotometlyczn
jakie
aa decydujo adunkubiaka'
wymie z rozrznieniem na
*
i
-
jaki
czynnik zewntrznydecydujeo wypadkowym adunubiaka?
narysujr,v.vkr.es
powod1'nier,t
obIicz
procentowo
[ Pobierz całość w formacie PDF ]